О нас
- Отзывы КЛИЕНТОВ
- Подарки Клиентов
- Цены на ветеринарные услуги
- Цены на лабораторные исследования
- Вакцины и препараты
- Контактная информация

  Навигация
- Ветеринарный ФОРУМ
- ФотоГАЛЕРЕЯ
- Общественное Мнение
- Календарь Событий
- Статистика портала
- Рейтинг зоосайтов
- Он-лайн развлекуха
- Помощь по сайту
- Общий FAQ (старый) - полезно почитать
- Размещение Рекламы
- Добавить в Избранное
- Сделать стартовой

  Авторизация:
Имя:
Пароль:
Параметры
Запомнить вас:
Скрытный вход:


[ Регистрация ]

  Выборка в форуме:
Нюхай:
-Расширенная выборка (Рекомендуется!)
Выборка по нормативу Гугля :
Нюхай:
Сеть veterinars.ru
bull-doc.ru Dog100 TopZoo HotDog Каталог

Текущий Опросец:
Доверяете ли Вы своему лечащему врачу?
Вопрос исапользования и терапетического успеха
 0. У меня нет лечащего врача.
 1. Нет и назначениями не пользуюсь.
 2. Не доверяю, но назначениями пользуюсь.
 3. Доверяю, но проверяю.
 4. Доверяю однозначно. А то как же можно лечить?
 5. Вам бы такого врача, как у меня!
 

 Трибуна : Предложения и пожелания. А можно и початится...

Активисты Ветеринаров.ру   Самые активные
Имя Постов
- Сергей 28567
- Доктор Дулитл 2786
- Ryis' 2699
- ЭльФ 1527
- Попов Максим 1384
- Хозяйка спаниеля 1352
- llllubasha 1110
- Miss_Hope 987
- fio-rio 645
- glorian 640

  Поучаствовали

  Асcоцияция Ветеринарных Врачей-Практикантов настоятельно рекомендует:



  Реклама на сайте

 Всё о ветеринарии, ветеринарной медицине, ветеринарах и владельцах.


Ветеринарная Медицина и Собаководство

             


» Добро пожаловать, Гость. Для получения Бесплатных Ветеринарных консультаций необходимо Авторизвоваться
[ Вход :: Регистрация ]
  Ветеринарный FAQ  New FAQ - Типичные вопросы и частые ответы.          RULES: Правила Ветеринарного Форума.       Ветеринарная консультация - Как получить?   Как задать вопрос Ветеринару
 

[ Подписаться на эту тему :: Отправить тему по email :: Распечатать эту тему ]

Ответить в тему Новый вопрос ветеринару Новый опрос
Тема: Практические рекомендации по иммуноферментной диаг, Статья< Предыдущая тема | Следующая тема >
Гость
Незарегистрированный









Пост Отправлено: 28 мая 2007, 14:07 QUOTE

на главную

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РФ

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК

ОТДЕЛЕНИЕ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ

СЕКЦИЯ "ПАТОЛОГИЯ, ФАРМАКОЛОГИЯ И ТЕРАПИЯ ЖИВОТНЫХ"

ФГОУ ВПО "ВОРОНЕЖСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ

АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ К.Д.ГЛИНКИ"

ООО "ПЕРВАЯ ВЕТЕРИНАРНАЯ КЛИНИКА", г.САРАТОВ



Терентюк Г.С., Черванев В.А.,

Трояновская Л.П., Пальцев С.С.



Практические рекомендации по иммуноферментной диагностике онкологических заболеваний органов размножения у животных



Воронеж

2005

Практические рекомендации разработаны сотрудниками кафедры хирургии ФГОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет имени К. Д. Глинки» (В.А. Черванёв, Л.П. Трояновская, С.С. Пальцев) и ООО «Первая ветеринарная клиника», г. Саратов (Г.С. Терентюк).

Практические рекомендации рассмотрены, одобрены и рекомендованы к пуб­ликации секцией «Патологии, фармакологии и терапии» незаразных болезней животных Отделения ветеринарной медицины РАСХН «24» марта 2005 года, протокол № 1.

© Г.С. Терентюк, В.А. Черванёв,

Л.П. Трояновская, С.С. Пальцев, 2005

ISBN 5-7267-0404-5                                                      © Издательство ВГАУ, 2005



ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ                                                                                                              
РОЛЬ МОРФОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ В ДИАГНОСТИКЕ ОПУХОЛЕЙ        

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ОНКОЛОГИЧЕСКИ БОЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ

ДИАГНОСТИКА ОПУХОЛЕЙ                                                                        

ОСОБЕННОСТЬ    ПРОЯВЛЕНИЯ    НЕОПЛАЗИИ    В    КОСТНОЙ

ТКАНИ                                                                                                                      

ДИАГНОСТИКА РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ                                    

МЕТОД ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА РАКА МОЛОЧНОЙ

ЖЕЛЕЗЫ                                                                                                                  

АНТИГЕНЫ, ВЫЯВЛЯЕМЫЕ ПРИ НЕОПЛАЗИИ У ЖИВОТНЫХ

ПРОСТАТИЧЕСКИЙ СПЕЦИФИЧЕСКИЙ АНТИГЕН (ПСА)          

РАК ЯИЧНИКА                                                                                                        

ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ОРГАНИЗМА ПРИ ОНКО­
ЛОГИИ                                                                                                                        

ИММУНОГЛОБУЛИНЫ ПРИ НЕОПЛАЗИИ                                                          

ОСОБЕННОСТИ ИММУНОТЕРАПИИ БОЛЬНЫХ С ОНКОПАТО-

Л ОГИЕЙ                                                                                                                      

ЛИТЕРАТУРА                                                                                                            



ВВЕДЕНИЕ

Современная кинология является развитой отраслью, имеющей важное значение в разных сферах деятельности человека. Количество собак в мире ог­ромно и непрерывно увеличивается. По данным книги рекордов Гиннеса (1981), численность собак в США составляет 41 млн., в Великобритании - 5,5 млн. В нашей стране численность собак также велика. Так, в г. Саратове в 14 клубах собаководства зарегистрировано 25 тысяч собак и столько же незарегистриро­ванных, не считая бездомных, бродячих животных.

В настоящее время разведением и совершенствованием разных пород собак занимаются во всех странах мира. Древнегреческие ученые Плутарх и Плиний в своих трактатах указывали на важное место собак в человеческом обществе, а в египетских памятниках (3400-2100 лет до нашей нличные породы (В.В. Анников, 1994).

Собаки, как и другие виды животных подвержены различным заболеваниям.

По частоте опухолевых заболеваний они стоят на первом месте среди домашних и сельскохозяйственных животных. Из общего числа онкологически больных собак до 50,0 % занимают опухоли молочных желез и репродуктивных органов, агрессивность и метастазирование которых нередко приводит к летальному исходу даже после радикальной операции (С.В. Баранов, 1991; O.K. Суходольский, 1994; А.С. Рыхлов, В.В. Анников, 2000; С.Н. Мищенко, 2002). В патологии злокачественные новообразования представляют собой одну из сложных задач диагностики и терапии (П.Ф. Терехов, 1986).

Опухоли молочных желез зарегистрированы во многих странах Северной и Южной Америки, Африки, Европы, Азии и Австралии (G.H. Theilen et al, 1979). В крупных населенных пунктах и городах, где много бездомных собак, заболевание принимает энзоотический характер (D. Rottcher, F. Frank, 1972;Y.D. Kurzman et al, 1993).



В патологии молочных желез и половых органов собак злокачественные новообразования занимают особое место. Они служат причиной нарушения воспроизводительной способности, достигнув значительных размеров, вызы­вают бесплодие самок. Прогрессируя в своем развитии, опухолевая болезнь де­лает собаку практически непригодной для хозяйственного использования и в конечном счете, приводит к гибели (П.Ф. Терехов, 1986). Неоплазия молочных желез не составляет экономическую проблему и не играет ведущей роли, но в социально-моральном плане лечение ее является неотъемлемой задачей практической ветеринарии. В то же время, изучение бластоматозного процесса имеет большое научное значение для сравнительной и экспериментальной онкологии.

Вопросы, связанные с изучением этиологии и патогенеза злокачествен­ных новообразований, а так же изыскание наиболее эффективных мер борьбы настолько актуальны, что для координации всей работы по проблеме рака соз­даны международные, национальные комитеты и специальные бюро (Доклады ВОЗ, 1990).

К сожалению, достижения онкологии и результаты научно-технического процесса в биологии и медицине не только редко применяются в ветеринарной практике, но мало известны ветеринарным специалистам.

В работах Y.D. Kuzman, S.R. Gilbertson (1986), Е. Hellman, R. Bergstom, L. Holberg, et. al. (1993) сравнивались различные факторы прогностической зна­чимости для собак с опухолями молочных желез. Достоверные прогностиче­ские индикаторы биологического поведения опухоли включают гистологиче­ский тип, вид роста, клиническую стадию, размер, степень нуклеарной диффе­ренциации и плоидность ДНК. Однако, несмотря на эти индикаторы, биологи­ческое поведение опухолей молочных желез у собак остается трудно прогнози­руемым. Необходимы дополнительные, более точные показатели для иденти­фикации больных с высоким риском рецидива опухоли.



РОЛЬ МОРФОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ В ДИАГНОСТИКЕ ОПУХОЛЕЙ

Роль морфологических исследований в диагностике опухолей неуклонно возрастает в связи с расширением круга хирургических вмешательств и усо­вершенствованием методов биопсий. Лишь детальная морфологическая харак­теристика новообразования может дать возможность более обоснованно вы­брать метод лечения, поскольку опухоли различного строения, происхождения и степени атипии клеток по-разному реагируют на терапевтическое воздействие. Таким образом, полноценный онкологический диагноз всегда является морфологическим, с детальной характеристикой структуры опухоли во всех ее аспектах (НА. Краевский, А.В. Смольянников, Д.С. Саркисов, 1993).

В клинической онкологической практике, не располагая данными микроскопического (гистологического и цитологического) исследования, невозможно установить точный и ранний диагноз опухоли, назначить соответствующее лечение, определить оптимальные границы объема и степени радикальности опе­раций, учесть течение и прогноз заболевания (А.Н.Мельник,1983).

Знание цитологических признаков опухолей и опухолевидных образова­ний, достоверность заключений и быстрота приготовления препаратов позво­лили специалистам (Н.Г. Алексеев, 1955; А.Н. Мельник, 1969; А.С. Петрова, В.К. Соколова, 1974; М.Г. Абрамов, 1974; С.А. Сильченко, 1978) применить цитологический метод в срочной диагностике у операционного и секционного стола.

Клиническая цитология окончательно утвердилась в качестве самостоя­тельной специальности по морфологической диагностике патологических про­цессов и заболеваний человека опухолевой природы (А.С. Петрова, 1985). Это позволяет предположить возможность широкого применения цитологических исследований при диагностике различных новообразований у животных с це­лью повышения точности морфологической диагностики и учитывая преимущества данного метода (простота, быстрота, легкая повторяемость, отсутствие больших материальных затрат).

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ОНКОЛОГИЧЕСКИ БОЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ

Многообразие патологических форм, индивидуальность их проявления у различных животных делают процесс диагностики нередко крайне трудным. В связи с этим средств субъективного характера, основанных на личных знаниях и навыках ветеринарного врача, порой оказывается недостаточно дли верифика­ции опухоли.

Поэтому клиническая ветеринарная практика постоянно ищет все новые и новые объективные точки опоры для возможно более ранней, точной диагно­стики, как в сфере собственно клинических наблюдений, так и в достижениях биологических, физических, химических и других наук. Как следствие, сфера так называемых параклинических отраслей гуманитарной и ветеринарной медицины неуклонно расширяется.

Можно выделить три основных группы объективных методов исследования животного:

1.       Методы выявления и изучения изменений структуры тканей и пространственных соотношений органов друг с другом. К их числу относятся рентгенологические, в том числе рентгеноконтрастные исследования, радиоизотопное сканирование, ультразвуковое исследование, тепловидение, эндоскопия и другие.

2.       Методы изучения функционирования органов и систем по их электрическим, звуковым, механическим и иным проявлениям.

3.       Методы выявления изменений химического и клеточного состава биожидкостей и других биоматериалов.



ДИАГНОСТИКА ОПУХОЛЕЙ

Условно можно наметить несколько типичных этапов процесса постановки диагноза:

1.      Обнаружение отклонений состояния организма от нормы.

2.  Трактовка отклонений - их значимость, физиологический или патологический характер, возможная связь с определенной нозологической формой.

3.  Формирование диагностического предположения (предположительный диагноз).

4.  Подтверждение диагноза, то есть установление окончательного диагноза (в противном случае процесс диагностики возобновляется, начиная с третьего или второго, а иногда и с первого элемента.

Таким образом, главную ответственность за постановку диагноза несет ветеринарный врач, но его задача может быть существенно облегчена адекватной помощью диагностических служб, среди которых определенное место занимает лабораторная диагностика.

Одним из современных методов исследований, который успешно применяется в ООО «Первая ветеринарная клиника», г. Саратова, является иммуно-ферментный анализ. Результаты иммуноферментного анализа получают на современном оборудовании с высокой разрешающей способностью и надежностью. При этом используются высококачественные реактивы, обладающие высокой чувствительностью, специфичностью и воспроизводимостью полученного результата. В клинике осуществляется комплексный подход к лечению онкологических заболеваний.

Однако, применение массированной и дорогостоящей терапии у онко-больных животных оправдано лишь при постановке точного диагноза. Это обеспечивает ее эффективность.



ОСОБЕННОСТЬ ПРОЯВЛЕНИЯ НЕОПЛАЗИИ В КОСТНОЙ ТКАНИ

Костная система наиболее часто поражается метастазами при опухолях различной локализации и, в частности, при раке молочной железы (РМЖ). По данным различных авторов (П.Ф. Терехов, 1983; Л.П. Трояновская, 1987; С.Н. Цепковская, 2002; Г.С. Терентюк, 2003) метастазы в кости при РМЖ проявля­ются у 70 - 80% животных с распространенными формами заболевания. Наибо­лее часто поражаются поясничные (59%) и грудные (57%)отделы позвоночника, кости таза (49%) и ребра (30%), то есть в основном вовлекаются в процесс кос­ти осевого скелета. Не более чем у 20 % больных костные метастазы являются единственным проявлением заболевания. Механизмы, лежащие в основе пора­жения костной ткани клетками рака молочной железы, сложные и включают уникальные свойства как самой опухоли, так и костной системы в целом. Предрасположенность некоторых опухолей (молочной и предстательной желез) метастазировать в кости осевого скелета объясняется наличием венозно-вертебралъного сплетения, куда поступает кровь из молочной железы и полости таза. Это сплетение характеризуется отсутствием клапанов, базальных мембран в сосудах костного мозга, низким внутрисосудистым давлением, что создает благоприятные условия для экстравазации опухолевых клеток. Однако одного попадания клеток рака молочной железы в костную систему недостаточно для формирования метастатического очага.

Костная ткань обладает уникальной способностью постоянно регенерировать под влиянием системных и локальных гормонов, факторов роста, цитокинов. Скелет животных находится в динамическом состоянии, так как коорди­нирующее действие остеокластов и остеобластов на трабекулярной поверхности приводит к постоянному чередованию процессов резорбции и костеобразования. При нормальных процессах перестройки костной ткани в результате действия остеокластов на гидроксиапатит костного матрикса, а также за счет про­дукции протеолитических ферментов и ионов водорода происходит резорбция кости, образование лакун в местах действия этих клеток. Последующее косте



образование происходит под влиянием остеобластов, которые синтезируют бел­ки костного матрикса (коллаген 1 типа, остеокальцин, остеонектин). Они отве­чают за секрецию факторов роста и минерализацию формирующейся костной ткани. Метастазирование опухолевой клетки в кости приводит к активному об­разованию местных паракринных факторов, стимулирующих активность остео­кластов: простагландина Е, ряда цитокинов, таких как TGF - а,Ь, эпидермаль-ный фактор роста (EGF), фактор некроза опухоли (TNF), интерлейкинов (IL-1, IL- 6 ), прокатепсина Д и др. Клетки иммунной системы могут также синтези­ровать факторы, активизирующие остеокласты: лимфотоксин, IL-6, IL-1, ин­терферон-гамма (IFN-g), колониестимулирующие факторы, в частности GM-CSF.

Помимо местных факторов, активность остеокластов может стимулиро­ваться системными воздействиями, а именно, пара-гормонподобным белком (РТНгР), При исследованиях в эксперименте установлено, что опухолевые клет­ки, экспрессирующие РТНгР, отличаются как высокой частотой метастазирова-ния в кости, так и предрасполагают к возникновению гиперкальциемии.

Таким образом, имеются убедительные доказательства того, что клетки рака молочной железы продуцируют факторы, активизирующие остеокласты, которые вызывают резорбцию костной ткани. При этом выделяются цитокины и факторы роста, которые, в свою очередь, стимулируют пролиферацию опухоле­вых клеток. В связи с чем образуется "порочный круг".

ДИАГНОСТИКА РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

В комплексной диагностике рака молочной железы мы используем опре­деление капьцитонина, кальция, фосфора в сыворотке крови. Кальцитонин пер­вично синтезируется в парафолликулярных С-клетках щитовидной железы как препрогормон с молекулярной массой 17кДа. После отщепления короткого N-концевого сигнального пептида и получающегося в результате этого N-концевого бокового пептида кальцитонин находится в секреторных гранулах.

10



Во время внутриклеточного процессинга, сразу после секреции, отщепляется С-концевой боковой пептид - катакальцин. В итоге полученная молекула кальци­тонина (32 аминокислотных остатка) секретируется в эквимолярных количест­вах с катакальцином (21 аминокислотный остаток). Альтернативный сплайсинг исходного гена кальцитонина приводит к образованию продукта, снязанного с геном кальцитонина (CGRP) . CGRP, как правило, образуется в более низких количествах, чем кальцитонин, и секреторные характеристики двух пептидов обычно идентичны. Другие структурно родственные белки, такие как амилин, секретирующийся клетками островков Лангерганса, представляют примеры дублирования гена.

Основная функция кальцитонина - уменьшение концентрации кальция в плазме. Доказано, что относительно небольшой прирост концентрации внекле­точного кальция стимулирует секрецию кальцитонина. Под влиянием кальцито­нина ослабляется деятельность остеокластов (клеток, разрушающих кость) и активируется деятельность остеобластов (клеток, участвующих в формирова­нии костной ткани). В силу этого тормозится резорбция костного минерала - ок-сиапатита - и, наоборот, усиливается отложение его в органическом матриксе кости. Наряду с этим он предохраняет от распада органическую оенэву кости -коллаген, стимулируя его синтез. Чрезвычайную биологическую значимость имеет влияние кальцитонина на транспорт кальция через клеточные мембраны. Транспорт кальция через клеточные мембраны осуществляется путгм его пас­сивного притока и активного оттока. Кальцитонин уменьшает активный транс­порт кальция из клеток, переводя его в связанное состояние. Благодаря этому он осуществляет гормональный контроль кальциевой проницаемости клеточных мембран, содержания и внутриклеточного распределения кальция: з этих про­цессах он взаимодействует с паратгормоном. Механизм действия катьцитонина связан с активацией аденилатциклазы и синтеза цАМФ. По видимому, в костной ткани имеются две системы аденилатциклаза - цАМФ, одна из которых чувст­вительна к кальцитонину, другая - к паратгормону. Соответственно одна из них стимулирует резорбцию кости, другая тормозит ее и активирует остеосинтез.

11



Калыдитонин понижает также содержание фосфора в плазме, увеличивая экскрецию фосфата. Кальцитонин усиленно синтезируется при различных фор­мах стресса. В результате этого тормозится действие гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы. Избыточная продукция кальцитонина и катакальци-на наблюдается в опухолевых клетках. Поскольку частота метастазирования ра­ка молочной железы в костную ткань достаточно велика, количественное опре­деление кальцитонина несомненно имеет диагностическое и прогностическое значение.

МЕТОД ИМУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

Уровень кальцитонина определяют методом иммуноферментного анализа. Материалом для исследования служит сыворотка крови животного. Для полу­чения сыворотки кровь из вены берут в чистую, сухую пробирку и после обра­зования сгустка центрифугируют при 1500-2000 об/мин. При невозможности сразу исследовать материал допускается замораживание сыворотки при темпе­ратуре -25°С градусов. Для определения уровня кальцитонина мы используем иммуноферментные системы фирмы "DyaSys", производства Германии. Изме­рения проводим на иммуноферментном анализаторе "Stat Fax Plus 1904".

Принцип метода. Твердофазный двухступенчатый «Sandwich» - вариант иммуноферментного анализа на планшетах. Стандарты, контроли и образцы сывороток инкубируются в микроячейках, покрытых антикальцитониновыми антителами. После инкубации и промывки ячейки обрабатываются другими ан­тикальцитониновыми антителами, мечеными пероксидазой хрена. После второй инкубации и промывки, ячейки инкубируются с субстратом тетраметилбензи-дина. Добавляется кислотный стоп-раствор, а степень ферментного превраще­ния субстрата определяется измерением на 450 нм с фильтром сравнения 620 нм. Измеренная оптическая плотность прямо пропорциональна концентрации кальцитонина. Нормальные значения кальцитонина в сыворотке не должны превышать 50 нг/л.

12



Гиперкальциемия, индуцированная опухолью, - наиболее частое угро­жающее жизни больного нарушение метаболизма, возникающее при распро­страненных формах злокачественных новообразований. Частота возникновения гиперкалыщемии, по данным различных авторов (J.A. Kanis, 1996; S. Ljungball, 1999) наблюдается у 30-40 % больных раком молочной железы, при наличии метастатических форм.

На сегодняшний день известны два механизма развития этого состояния:

а) локальное остеолитическое действие костных метастазов.

Непосредственная локальная инвазия костей опухолевыми клетками ак­тивирует остеокласты и стимулирует высвобождение ионов кальция в кровь до уровня, который превышает экскреторные возможности почек. Костная резорбция усугубляется цитокинами и другими факторами, которые продуцируются инвазивными опухолевыми клетками.

б) за счет гуморальных факторов.

Гиперкалъциемия может наблюдаться также у больных, которые не имеют метастатических поражений костей. В этих случаях паратгормоноподобный бе­лок, экспрессируемый внекостными опухолевыми поражениями, повышает обу­словленную остеокластами костную резорбцию, а также увеличивает в значи­тельной степени реабсорбцию ионов кальция в дистальных канальцах почек, понижая реабсорбцию фосфатов. Гиперкальциемия и гиперкальциурия приво­дят к нарушению реабсорбции натрия и воды, вызывая полиурию, соответст­венно снижается объем циркулирующей и межтканевой жидкости. Возникает замкнутый круг: гиповолемия приводит к снижению почечного кровотока, что, в свою очередь, уменьшает степень клубочковой фильтрации, а это нарушение вызывает повышение реабсорбции кальция в проксимальных отделах почечных канальцев. Усугубляют обезвоживание и частые рвоты. Симптомы гиперкаль-циемии могут проявляться со стороны различных органов и систем:

•    центральная нервная система - заторможенность, проксимальная миопа-

•  .сердечно-сосудистая система - гипотония, брадикард.ия,, укорочение ин-

13



тервала QT, удлинение интервала PQ, расширение волн Т, предсердная и желудочковая аритмия, асистолия;

•      пищеварительная система — анорексия, рвота, запоры, кишечная непроходимость, панкреатит;

•      мочевыделителъная система - полиурия, нефрокальциноз;

•      общие симптомы - слабость, обезвоживание, кожный зуд, снижение массы
тела.

Возможны случаи бессимптомного течения гиперкальциемии, но при умеренно выраженной или тяжелой ( кальция более 3,0 ммоль/л ) - наблюдают­ся различные сочетания перечисленных выше признаков, с нарастанием сим­птоматики по мере увеличения уровня кальция в крови. При этом следует отме­тить, что гиперкальциемия часто диагностируется несвоевременно, поскольку имеется склонность трактовать многие симптомы как следствие прогрессирова-ния онкологического заболевания или осложнений лечения.

Уровень кальция в сыворотке мы определяем О-крезолфталеиновым ме­тодом на биохимическом анализаторе "Stat Fax Plus 1904" с использованием ре­активов фирмы "DyaSys".

Принцип метода: ионы кальция в щелочной среде взаимодействуют с О-крезолфталеиновым комплексом с образованием окрашенного соединения, ин­тенсивность окраски которого прямо пропорциональна концентрации кальция в пробе и измеряется при длине волны 570 нм. Нормальные величины концентра­ции кальция в сыворотке составляют 2,15 - 2,6 ммоль/л, в моче - 2,5 - 6,2 ммоль/сутки.

Уровень концентрации фосфора в сыворотке крови определяем по вос­становлению фосфорномолибденовой кислоты. Используем реактивы фирмы "DyaSys", производства Германии. Измерения проводим на биохимическом ана­лизаторе "Stat Fax Plus 1904".

Принцип метода: неорганические фосфат-ионы в кислой среде в присут­ствии детергента образуют с молибденовой кислотой фосфорномолибденовую кислоту. Абсорбция этого продукта, прямо пропорциональная концентрации не-

14



органического фосфора, измеряется в ультрафиолетовой области - при 340 нм.

АНТИГЕНЫ, ВЫЯВЛЯЕМЫЕ ПРИ НЕОПЛАЗИИ У ЖИВОТНЫХ

Иммунные механизмы играют в организме важную роль задолго до появ­ления клинически определяемой опухоли и продолжают играть не менее важ­ную роль после избавления от нее.

Известно, что переход от нормальной клетки к опухолевой (туморогене-зис) ассоциируется с множеством физиологических изменений:

•      потерей контактной ингибиции;

•      увеличением скорости пролиферации клеток;

•      изменением антигенного профиля клетки.

В последнем случае внутри клетки (в ядре, цитоплазме) и на ее поверхно­сти появляются новые антигены. Часть из них экспрессируется и попадает в циркуляторное русло. Такие антигены, как правило, очень специфичны для данной опухоли и обнаруживаются у всех больных этим видом опухоли. При­мером таких антигенов может быть простатический специфический антиген, который появляется в клетках предстательной железы при развитии рака и мо­жет быть обнаружен на ранних этапах развития процесса (табл. 1).

Таблица 1

Специфические антигены, выявляемые у всех больных определенным видом опухоли



Антиген
Патология

Простатический специфический (PSA)
Рак предстательной железы

Белок    с     молекулярной    массой 5,3*10В(т.н.Р-53)
Опухоль мочевого пузыря

Плоскоклеточного рака (SCC)
Плоскоклеточный рак легкого, пищево­да, прямой кишки

СА-19-9
Рак поджелудочной железы

Са-125
Рак яичников

СА-15-3
Рак молочной железы


15



Имеются другие опухолеассоциированные антигены, которые могут экс-прессироваться на нормальных клетках, но в других стадиях онтогенеза (на­пример, в эмбриональном периоде). Это так называемые онкофетальные (опухолеэмбриональные) антигены (табл.2).

Таблица 2 Опухолеэмбриональные антигены



Антиген
Патология

Альфа-фетопротеин
Первичный рак печени, герминативные опухоли яичка, предстательной железы, цирроз печени.

Раковоэмбриональный
Рак толстой кишки, поджелудочной же­лезы, реже - рак желудка, молочной же­лезы, легких, матки, яичника.

Бета-хорионический гонадотропин
Трофобластические опухоли матки, яичников, яичек.


Такие антигены присутствуют в период нормального развития плода на поверхности клетки, но в процессе дифференцировки теряются, вероятно, под влиянием гена-репрессора. В период развития опухоли ген депрессируется и такие антигены вновь появляются на поверхности клетки.

Для верификации диагноза в онкологической практике мы используем це­лый ряд ИФА-тест-систем для определения онкомаркеров в крови животных. С их помощью возможна диагностика и мониторинг трофобластических опухо­лей: рака простаты, яичников и яичек, молочной железы, рака печени, желудка, поджелудочной железы, кишечника, мелкоклеточного рака легкого, нейробла-стомы и лимфом.

Онкомаркеры - большая группа факторов, обнаруживаемых в злокаче­ственных и ассоциированных со злокачественным ростом клетках. Опухолевые маркеры представляют собой макромолекулы в основном белки с углеводным или липидным компонентом. Они формируются внутри или на поверхности опухолевых клеток, или же в результате индукции образуются в других клетках.

Считается, что опухолевые маркеры в практической онкологии должны отвечать нескольким требованиям:

16



-  быть селективно связанными с опухолевым ростом;

-  концентрации их в сыворотке крови или моче должны коррелировать со
стадией развития злокачественного процесса;

- обнаруживаться до клинического проявления опухолевого роста.
Основным применением иммуноферментных тест-систем для выявления

опухолевых маркеров является ранняя диагностика, мониторинг течения забо­левания, а также определение эффективности хирургического лечения и радио-, химио- и гормонотерапии. При этом именно динамика изменения концентрации маркера представляет большой интерес, нежели единичное значение его уровня, взятое само по себе. Скорость возрастания концентрации опухолевого маркера обычно позволяет сделать заключение о прогрессировании заболевания,1 в част­ности, о метастазировании. Рецидивирование или метастазирование может быть обнаружено при помощи опухолевых маркеров более чем за 6 месяцев до клинической манифестации.

За многолетний опыт использования иммуноферментного анализа в по­вседневной практике мы определили для себя некоторый перечень онкомаркеров, который обладает, на наш взгляд, наибольшей чувствительностью и специ­фичностью и может быть использован в комплексной диагностике онкологиче­ских заболеваний.

Материалом для исследования служит сыворотка крови. Кровь для иссле­дования берется из вены в сухую, чистую пробирку. Центрифугирование крови осуществляют при 1500 -2000 об/мин. При невозможности сразу исследовать полученную сыворотку, она может быть заморожена при температуре -25°С. Исследование проводим на иммуноферментном анализаторе "Stat Fax Plus 1904", используем реактивы фирмы "DyaSys".

Принцип метода: твердофазный двухступенчатый «Sandwich» - вариант иммуноферментного анализа на планшетах.

17



ПРОСТАТИЧЕСКИЙ СПЕЦИФИЧЕСКИЙ АНТИГЕН (ПСА)

На ранних стадиях рак предстательной железы протекает бессимптомно и при первичном обращении до 70% больных животных уже имеют местнорас-пространенные и метастатические поражения. При своевременном обнаруже­нии рака предстательной железы эффективность его лечения весьма высока.

Простатический специфический антиген был выделен и охарактеризован в 1979 году.

ПСА - гликопротеин с молекулярной массой 340000, состоящий из одной полипептидной цепи, нарабатывается эпителиальными клетками простаты. Со­держание этого онкомаркера в крови у больных резко возрастает даже на ран­них стадиях рака предстательной железы.

Измерение концентрации ПСА в сыворотке крови является удобным и достаточно надежным методом ранней диагностики этого заболевания. На сего­дняшний день ПСА является единственным онкомаркером, определение которо­го рекомендовано ACS (American Cancer Society) при проведении массового скрининга.

У больных с заболеванием раком предстательной железы отмечается кон­центрация ПСА 1000 нг/мл и выше (вплоть до 1500 нг/мл ). Значение выше 30 нг/мл почти всегда означает наличие злокачественных новообразований, при концентрациях 10-30 нг/мл вероятность наличия опухолей составляет 75-85 %.

Наибольшую трудность представляет интерпретация результатов анализа, при которых концентрация ПСА в крови составляет 4-10 нг/мл. Известно, что содержание ПСА в сыворотке крови может повышаться не только при раке предстательной железы, но и при доброкачественной гиперплазии предстатель­ной железы, простатитах, острых и хронических воспалениях. Однако при этих заболеваниях уровень ПСА редко достигает значений выше 10 нг/мл, а содер­жание ПСА при доброкачественной гиперплазии предстательной железы про­порционально размеру железы. Поэтому в отношении рака предстательной же­лезы прогностическая ценность теста, в котором ПСА был выявлен с концен-

18



трацией 4-10 нг/мл, составляет примерно 25 %. В этих случаях мы рекомендуем проводить дополнительное инструментальное обследование пациентов и био­псию. Определение уровня простатического специфического антигена играет также большую роль при контроле за ходом лечения больных животных. Ради­кальная простатэктомия приводит к снижению содержания ПСА в сыворотке крови до минимально регистрируемых значений. Дальнейшее наблюдение за такими животными позволяет определять наступление рецидива за 3-5 месяцев до его клинического проявления.

Сложность проблемы рака яичников заключается в особенностях этиоло­гии и патогенеза опухолей этого органа, в уникальности самой природы яични­ка и его роли в жизнедеятельности самки. Многокомпонентное строение гонад, сочетание структур самых разных функциональных направлений обусловлива­ют широчайший спектр гистологических форм новообразований этого органа. Если же принять во внимание еще и переходные формы, а также опухоли, в ко­торых сочетаются два и более гистотипа, то количество вариантов новообразо­ваний яичников возрастет в геометрической прогрессии. Необычность опухолей яичников подтверждается случаями мультицентрического роста, когда первич­ные очаги опухоли обнаруживаются в забрюшинном пространстве, но при аб­солютно не измененных яичниках.

Несмотря на многочисленные попытки выделения различных градаций по степени злокачественности, основное возражение против такого деления за­ключается в том, что оно условно. Это связано с тем, что в больших опухолях наряду с высокодифференцированными, можно встретить умеренно- и низко-дифференцированные клетки. Это вызывает значительные затруднения при трактовке гистологической формы новообразования. Кроме того, дифференци-ровка может меняться при прогрессировании заболевания, а также под воздей­ствием проводимой химиотерапии и быть абсолютно различной в первичной опухоли и ее метастазах.



РАК ЯИЧНИКА

Подавляющее большинство животных (85%) страдают эпителиальными формами опухолей яичника. Степень распространения, а соответственно, и ста­дия болезни устанавливается на основании данных клинического обследования, результатов оперативного вмешательства и гистологического изучения биопта-тов, взятых во время операции с различных участков брюшной полости. Пра­вильное определение стадии болезни позволяет выбрать оптимальную тактику и улучшить результаты лечения.

Ранняя диагностика рака яичников трудна, так как до сих пор не сущест­вует специфических диагностических тестов, позволяющих выявить опухоль на начальных этапах ее развития. Следует помнить, что некоторые злокачествен­ные новообразования, такие как рак желудочно-кишечного тракта или молочной железы, могут метастазировать в яичники. Исключить наличие первичной опу­холи в желудке, толстой кишке или молочной железе позволяют гастроскопия, колоноскопия и маммография. Рентгенография грудной клетки является обяза­тельным компонентом обследования при подозрении на опухоль яичников, т.к. позволяет диагностировать возможное метастазирование в легкие и плеврит.

Все эти исследования дают основание с большей или меньшей долей ве­роятности заподозрить опухоль яичников. Однако только гистологическая ве­рификация диагноза может дать точный и окончательный ответ. Одним из наи­более интересных и перспективных направлений в диагностике злокачествен­ных опухолей является определение опухолевых маркеров. Изучение этих ве­ществ представляет большой интерес не только с практической, но и с теорети­ческой точки зрения. Проводимые в этом направлении исследования позволяют глубже понять этиологию и патогенез злокачественного роста, изучить многие процессы, происходящие в организме.

Несмотря на кажущееся обилие опухолевых маркеров, единственно на­дежным тестом при раке яичников, причем в основном при серозной его форме, является определение СА-125: его повышение отмечено у 88,8% первично об-

20



следованных животных. Однако следует особо подчеркнуть, что при исследова­нии сывороток крови больных с 1-й стадией заболевания содержание маркера практически не отличается от такового в контроле. При II, III и IV стадиях забо­левания уровни СА-125 повышаются и могут использоваться для мониторинга заболевания.

Наблюдаемое повышение уровней СА-125 при рецидивах заболевания свидетельствует о необходимости мониторинга всех животных, находящихся в ремиссии, так как лишь у 1 из 10 больных результат исследования бывает лож-ноотрицательным. Более того, даже если при первичном обследовании у неле-ченных животных показатели СА-125 не превышали норму, то в процессе ре­миссии анализ на содержание маркеров в крови необходим в связи с возможным вторичным повышением маркеров при рецидиве. Последнее, еще раз подтвер­ждает потенциальные возможности клеток рака яичников к изменениям, кото­рые проявляются морфологически и на биохимическом уровне.

В этом плане, безусловно, перспективным является определение СА-125 в период ремиссии и при рецидиве заболевания. Повышение уровня маркера от нуля (либо от базального уровня) до 35 ед/мл, то есть в пределах нормы, может быть доклиническим проявлением рецидива. Доказано, что у всех животных с уровнем СА-125 менее 1/2 ДК (ДК - дискриминационная концентрация маркера, равная 35 ед/мл) и ежемесячным приростом менее 20% от предыдущего значе­ния маркера рецидива в ближайшие 6 месяцев не наблюдалось. Если прирост превышал 20%, рецидив был диагностирован через 4-6 месяцев. У животных со значением СА-125 от 1/2 до 1 ДК и приростом свыше 20% в месяц рецидив регистрировался в ближайшие 2-4 месяца. Если значение маркера превышало ДК, а его прирост был свыше 20%, то рецидив можно было обнаружить спустя 1-3 месяца. Очевидно, что использование СА-125 позволяет не только диагно­стировать наличие рецидива с достаточно высокой точностью, но и с большей вероятностью прогнозировать его развитие. Чувствительность СА-125 при ре­цидиве заболевания, своевременное лечение которого могло бы значительно по­высить эффективность терапии, заболевания составляет 97%. При полной ре-

21



миссии в отсутствие опухоли уровень СА-125 должен быть близким к нулю.

Повышение уровня маркера на фоне ремиссии должно стать основанием для комплексного углубленного обследования с целью выявления рецидива.

ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ОРГАНИЗМА ПРИ ОНКОЛОГИИ

Мы попытались оценить иммунологическую активность у нашего кон­тингента больных животных, изучая клеточные и гуморальные звенья иммуни­тета.

Иммунная система подразделяется на две основные системы — гумо­ральную и клеточную. За функционирование гуморальной системы, в основ­ном, ответственны В-лимфоциты, а за клеточную - Т-лимфоциты. В противо­опухолевом ответе организма принимают участие обе системы, однако контроль за ростом и регрессией опухоли осуществляют Т-клетки. Образующиеся в про­цессе роста опухоли противоопухолевые антитела блокируют опухолеассоции-рованные антигены и препятствуют разрушению опухоли специфическими Т-лимфоцитами, способствуют ее ускользанию из под иммунологического надзо­ра. Регулируют развитие гуморального и клеточного ответа Т-клетки помощни­ки, так называемые хелперы. Т-хелперы 1-го типа ответственны за развитие клеточного иммунного ответа, а Т-хелперы 2-го типа индуцируют гуморальный иммунный ответ. В зависимости от того, какой тип хелперов будет преобладать, определяется судьба опухолевой клетки - или она будет убита цитотоксически-ми Т- лимфоцитами, или ускользнет от иммунного надзора.

Иммунные Т-клетки обычно активируются после их связывания с клет­ками других типов. Активация является следствием взаимодействий рецептор-лиганд на поверхности двух связывающихся клеток.

Иммуноглобулины (Ig), выполняющие в организме функцию антител, синтезируются плазматическими клетками, которые являются конечным этапом дифференцировки В-лимфоцита, наступившей в результате антигенного стиму-

22



ла и хелперного сигнала.

Иммуноглобулины представляют собой белки плазмы, которые при элек­трофорезе мигрируют как гамма-глобулины и образуют диффузную полосу в гамма-области электрофореграммы, что подтверждает их гетерогенность. Им­муноглобулины относятся к полифункциональным белкам и реализуют сле­дующие основные функции:

•      специфически распознают самые разнообразные антигены и гаптены (не­
полные антигены);

•      взаимодействуют с другими иммунокомпетентными клетками, имеющими
к ним соответствующие рецепторы;

•      активируют систему комплемента.

ИММУНОГЛОБУЛИНЫ ПРИ НЕОПЛАЗИИ

Структуры, ответственные за различные функции иммуноглобулинов, на­ходятся на разных участках молекул этих белков. Известно пять основных клас­сов иммуноглобулинов: Ig A, Ig M, Ig G, Ig Е, и Ig D. Остановимся на характе­ристиках отдельных классов иммуноглобулинов.

Иммуноглобулин М.

Имеет молекулярную массу 9,6 *10 (5) D, составляет 5-10 % всех сыворо­точных иммуноглобулинов. Основные характеристики иммуноглобулинов пред­ставлены в таблице 3.



Таблица 3

Характеристика иммуноглобулинов



Иммуноглобулин (Ig)
Кол-во в сыворотке кропи
Доля от об­щего кол-ва Ig, %
Функция
Период полураспада,

ДНИ

IgM
0,4-2,:»г/л
-10
Вырабатывается у плода. Ранние ан­титела против вирусов и грамотрица-тельных бактерий; активируют комплемент, усиливают фагоцитоз
Около 4-5

IgG
7-18 г/л
-70
Поздние антитела против полисаха-ридных антигенов бактерий, активи­руют комплемент, усиливают фагоци­тоз, проникают через плаценту. Ней­трализуют токсины.
Около 21

IgA
0,8-3,7 г/л
-15
Защищают слизистые оболочки (сек­реторный Ig А), нейтрализуют вирусы и бактериальные токсины.
Около 5-6

IgE
-0,25 мг/л
<5
Индуцируют аллергию, анафилаксию; реализуют защиту от паразитов; акти­вируют тканевые базофилы.
Около 2-3

IgD
3-170 мг/л
<1
Дифференцировка лимфоцитов
Около 2-3


В сыворотке крови содержится 0,4 - 2,2 г/л Ig M, период его полураспада 4 - 5дней. Антитела класса Ig M относятся к "ранним", представляют собой ос­новную массу антител, продуцируемых организмом новорожденных при инфи­цировании, обладают высокой авидностью, активируют комплемент по класси­ческому пути. Защищают организм от вирусов и бактерий, не проходят через плаценту. На каждый "новый" для организма антиген образуются антитела класса Ig M

'24



Очень важными свойствами Ig M являются привлечение ими фагоцити­рующих клеток в места расположения антигена или в очаг инфекцки. При этом происходит активация фагоцитоза. Опсонизируя антигенный раздражитель, в частности, микроорганизмы, усиливая фагоцитоз, Ig M с одной стороны, сни­жают антигенную нагрузку, а с другой стороны - опсонизируя возбудитель - ан­тиген, повышают продуктивность фагоцитоза. По мере увеличения синтеза Ig G и нарастания его титра резко тормозится синтез малоспецифичных Ig M, кото­рый регулируется только уровнем соответствующего ему по специфичности Ig G.

Синтез Ig М , поскольку в нем не участвуют Т- лимфоциты, резистентен к действию иммунодепрессантов и облучению.

Длительный синтез исключительно (или преимущественно) Ig M - при­знак нарушения регуляторной функции Т-лимфоцитов-хелперов.

Гипериммуноглобулинемия М один из первичных иммунодефицитов, обусловленный отсутствием на Т-лимфоцитах-хелперах СД40 лиганда и в связи с этим - невозможностью передачи костимуляционного сигнала В-лимфоцитам для переключения синтеза Ig M на синтез Ig другого класса. Являясь слабоспе­цифичными, Ig M могут связывать сразу пять молекул антигена. Это ведет к об­разованию крупных иммунных комплексов и способствует более быстрому вы­ведению антигенов из циркуляции, а также предотвращает возможность их прикрепления к клеткам и инициации патологического процесса. Подсчитано, что агглютинирующая и комплементсвязывающая способности Ig M в сотни раз активнее, чем у Ig G. Следует помнить, что часть Ig M продуцируется локально и относится к секреторным.

Иммуноглобулин G

Иммуноглобулин G имеет молекулярную массу 1.5* (5) D и, в отличие от Ig других классов, способен проникать через плаценту. Защищая организм но­ворожденного от инфекции в первые месяцы жизни. Он составляет до 70% всех сывороточных иммуноглобулинов. Концентрация Ig G в сыворотке крови нахо­дится в пределах от 7 до 18 г/л. Он является основным антителом вторичного

25



иммунного ответа. Период полураспада Ig G самый продолжительный 21 день. Основная биологическая функция иммуноглобулинов этого класса - защита ор­ганизма от возбудителей инфекции и продуктов их жизнедеятельности за счет активации комплемента, опсонизации и активации фагоцитоза.

Являясь тимусзависимыми, Ig G вырабатываются лишь при обязательном участии Т-лимфоцитов. Поэтому облучение, как и действие различных иммуно-депрессантов, не только нарушает синтез Ig G, но может подавить его полно­стью.

Максимальный синтез иммуноглобулинов G наблюдается после повтор­ного введения антигена с соблюдением определенного интервала, иногда до 30-35 дней.

Уровень Ig G в организме регулируется двояко: антигенной стимуляцией, вызывающей его синтез, и разрушением Ig. Конечная концентрация иммуногло­булинов G зависит от соотношения процессов его синтеза и деструкции. При недостаточном уровне иммуноглобулинов G его разрушение замедляется.

Таким образом, иммуноглобулины G представляют собой наиболее мно­гочисленный класс Ig. Обладая высокой специфичностью, они активно участ­вуют в иммунном ответе и одновременно регулируют его, влияя на активность других механизмов иммунного ответа - клеточных и гуморальных, определяя в конечном итоге полноценность иммунного ответа. В значительной степени им­муноглобулины G осуществляют контроль за образованием иммуноглобулинов по типу обратной связи.

Иммуноглобулин А

Составляет до 15 % всех сывороточных иммуноглобулинов. Ig А сущест­вует в двух формах: сывороточной и секреторной.

Концентрация сывороточного Ig А составляет 0,8 - 3,7 г/л. Период полу­распада 5-6 дней. Он способен обезвреживать микробы и токсины, циркули­рующие в крови, однако, его действие слабее, чем секреторного Ig A.

Сывороточный Ig А может активировать комплемент по альтернативному пути. Инактивация сывороточного Ig А может наступить под влиянием Ig A-

26



протеаз, которые продуцируются некоторыми микроорганизмами.

Секреторный Ig А отличается наличием дополнительного секреторного компонента (S), синтезирующегося эпителиальными клетками слизистых обо­лочек и присоединяющегося к молекуле Ig А в момент ее прохождения через эпителиальные клетки. S-компонент повышает устойчивость молекулы имму­ноглобулина к действию протеолитических ферментов. Секреторный Ig А оста­ется на слизистых оболочках, где нейтрализует бактериальные токсины и лока­лизует вирусы, а также стимулирует фагоцитоз, обеспечивая тем самым мест­ную резистентность к инфекции.

Секреторный Ig А преобладает в слюне, слезах, секретах желудка и ки­шок (особенно тонкой кишки), желчи, амниотической жидкости, в содержимом легких, бронхов, мочеполовых путей.

Богатым источником секреторного иммуноглобулина А является грудное молоко и, особенно, молозиво, где его количество значительно превышает со­держание в крови. Это обстоятельство трудно переоценить, поскольку Ig А от­носится к тимуснезависимым Ig и самостоятельный его синтез в самом раннем возрасте недостаточен для полноценной защиты. Поступление lg А с молозивом и грудным молоком самки предупреждает раннее заселение кишечника дете­ныша грамотрицательными бактериями, в частности кишечной полочкой и спо­собствует формированию грамположительной микрофлоры кишок, более бла­гоприятной для детенышей.

Таким образом, секреторный иммуноглобулин А, являясь важным эле­ментом местного иммунитета, защищает слизистые оболочки как от поселения на них патогенных микроорганизмов, так и от проникновения последних во внутреннюю среду организма. Тем более важно наличие синергизма между Ig A и механизмами неспецифической защиты - комплементом, лизоцимом, фагоци­тирующими клетками и их ферментами, что способствует осуществлению ан­тибактериальной защиты, повышая в целом ее эффективность.

Иммуноглобулин Е      '         "

Концентрация IgE в сыворотке крови составляет в среднем 0,25 мг/л, а у

27



животных с атоническими заболеваниями - в десятки и даже сотни раз больше. Способность к образованию Ig E в большей степени, чем других Ig, связана с наследственными факторами.

Иммуноглобулин Е не связывает комплемент, не проходит через плаценту; быстро и прочно связывается с тканевыми базофилами и с Fc-рецепторами на других "клетках воспаления". В результате взаимодействия фиксированного на поверхности этих клеток Ig E со специфическим антигеном происходит их де-грануляция с выделением во внеклеточное пространство биологически актив­ных веществ, обуславливающих клинические проявления аллергического вос­паления. ,Доказано, что Ig Е-антитела принимают участие в связывании антиге­нов на слизистой оболочке.

Иммуноглобулин Е продуцируется плазматическими клетками селезенки, слизистых оболочек дыхательных путей, желудка, кишок. Продукция Ig E начи­нается у плода очень рано. В отличие от других иммуноглобулинов, иммуногло­булин Е термолабилен (разрушается при 56 градусах). Одна из защитных функ­ций Ig E - участие в иммунитете против гельминтов. Помимо участия Ig E в развитии ряда аллергических реакций, этот класс иммуноглобулинов представ­ляет одну из главных линий защиты именно слизистых оболочек, контакти­рующих с окружающей средой, - верхних и нижних отделов дыхательных пу­тей, кишок.

Инфекционные агенты или чужеродные вещества, прорвавшие "первую линию обороны", которую осуществляют, как правило, Ig А, связываются спе­цифическим Ig E на поверхности тканевых базофилов. Результатом этого взаимодействия является следующий этап защиты - высвобождение из тканевых ба­зофилов, эозинофилов и базофилов крови вазоактивных аминов и веществ, которые обладают хемотаксической активностью. Это усиливает приток в очаг воспаление других защитных факторов, клеточных и гуморальных Ig G, ком­племента, миграцию нейтрофилов, эозинофилов и т.д.

Определение иммуноглобулинов мы проводили, используя реагенты для иммуноферментного количественного анализа.

28



Принцип метода: твердофазный двухступенчатый "Sandwich"- вариант иммуноферментного анализа на планшетах. Кровь для исследования собирается в сухую центрифужную пробирку в количестве 5 мл. Для отделения сыворотки пробирку с кровью центрифугируем при 1500-2000 об/мин. Затем вносим в лунки планшета с нанесенными моноклональными антителами к Ig по 100 мкл исследуемой сыворотки. Инкубируем планшет 45 минут при температуре 37 градусов. После инкубации промываем образцы 5 раз на вошере, встряхиваем и вносим коньюгат моноклональных антител к Ig с пероксидазой хрена. Осуще­ствляем повторную инкубацию в течении 30 минут при той же температуре. Вновь промываем стрипы и добавляем субстратную смесь на 15 минут, после чего останавливаем реакцию внесением в образцы серной кислоты. Измерения оптической плотности проводим на иммуноферментном анализаторе при длине волны 450 нм.

Определение иммунного статуса, в том числе его гуморальной состав­ляющей, имеет важное значение для полноценной диагностики патологических состояний. Весьма значительные изменения продукции иммуноглобулинов А, G, М отмечаются не только в онкологической практике, но и при многих других заболеваниях. Хотя на разных стадиях патологического процесса изменяются в первую очередь уровни специфических антител. Эти изменения часто столь зна­чительны, что сказываются на уровне общего иммуноглобулина того или иного класса. Данные иммунограмм могут представлять большую ценность для прак­тикующих ветеринарных врачей, так как помогают правильно поставить диаг­ноз, оценить стадию заболевания и, соответственно, назначить адекватное лече­ние.

Считаем, целесообразным привести примеры иммунограмм при некото­рых заболеваниях помимо онкологического процесса (табл. 3).

Z9



Таблица 3 Примеры иммунограмм при некоторых заболеваниях животных

Заболевания печени     IgG         IgA      IgM     IgE

                               
Острый инфекционный
гепатит
                                   +         N/+      LN/++   N

Хронический персистирующий
гепатит                          N/+     N          N/+     N/+

Хронический агрессивный
гепатит
                                     ++     +         N/++      N/+

Постгепатитный криптогенный цирроз
                                     ++      +          +          N/+

Первичный билиарный цирроз
                                     N/+     N                    N


Болезни почек

Острый пиелонефрит
                                      N       N      +/++        N

Хронический пиелонефрит
 
                                                 N     +/++     N/+
Нефротический синдром
                                        -        -       N/-      N/-

Инфекционные заболевания

Острая инфекция
                                         N        N    +/++        N

Хроническая инфекция
                                         +/++   N/+   N/+       N/+

Системные ревматические заболевания

Ревматоидный артрит
                                         N/++    N/++   N/+    +/++

Склеродермия
                                         N           N        N      N/+

Смешанные системные заболевания
                                         N/+         N/+     N      N/+

Атопия, аллергические заболевания
                                         N/+          N        N/-   +/++

Гельминтозы и др. паразитарные заболевания
                                        N/+         N/+      N/+
 


(N) - нормальная концентрация

(+) - повышенная концентрация от N до 1,3 N

(++) - сильно повышенная концентрация, более 1,3 N

(-) - пониженная концентрация, ниже N.




ОСОБЕННОСТИ ИММУНОТЕРАПИИ БОЛЬНЫХ С ОНКОПАТОЛОГИЕЙ

В иммунотерапии больных с онкологическими заболеваниями можно вы­делить два принципиально разных подхода:

•      воздействие на иммунную систему больного животного с целью иммуно-
реабилитации;

•      воздействие на опухоль.

Развитие опухоли, как правило, ассоциируется с возникновением тех или

30



иных нарушений в иммунной системе.

Следует помнить о влиянии на конкретного онкологического больного животного, подлежащего лечению, дополнительных факторов, неблагоприятно воздействующих на иммунитет.

К ним относятся:

•      стресс;

•      операционная травма;

•      наркоз;

•      возраст животного;

•      порода;

•      степень радикального удаления опухоли;

•      химиотерапия;

•      лучевая терапия;

•      степень нарушения питания.

Эти факторы могут иметь место у конкретного животного как все вместе, так и в различных сочетаниях. Все это необходимо учитывать при разработке плана иммунореабилитации.

Рекомендации относительно реализации плана иммунореабилитации мо­гут выглядеть следующим образом:

1.         До операции: иммуномониторинг - определение иммунного статуса и
наличие специфического опухолевого антигена,  при необходимости —
назначение иммуномодуляторов широкого спектра действия.

2.    После операции и химиотерапии: иммуномониторинг (идеально: опре­
деление ИЛ-10, ИЛ-6), детоксикация (энтеросорбция, плазмаферез). На­
значение иммуномодуляторов длительными курсами с учетом иммуно-
грамм.

Задачей исследователей, работающих с онкологической патологией, яв­ляется определение такого набора наиболее значимых, дополняющих друг дру­га показателей, который позволил бы при минимально возможной стоимости обследования обеспечить максимальную эффективность лечения.

31



Спектр исследований в каждом конкретном случае может зависеть от ста­дии заболевания, возраста, планируемой терапии и материально-технической базы клиники.



ЛИТЕРАТУРА

1.     Ввозный Э.К. Применение бифосфатов в клинической практике.- В кн.: 2-я ежегодная Российская онкологическая конф. - М., 1998. - С. 12-1'i.

2.  Ирвинг Л. Вейсман, Лерой Е. Худ. Введение в иммунологию. - М.:
Высшая школа, 1993. - С. 16.

3.  Колеман Р.Е. Биофосфонаты при лечении больных ранним и диссеми-
нированным раком молочной железы. Настоящее и будущее. - В кн.: 3-я еже­
годная Российская онкологическая конф. - СП-б., 1999,- С. 47-49.

4.  Клиническая иммунология / Руководство для врачей // Под редакцией
Е.И.Соколова. - М: Медицина, 1999. - С. 272-274.

5.  Моисеенко В.М., Блинов Н.Н. Метастатическое поражение костей при
солидных опухолях и возможности использования бонефоса в клинической он­
кологии (Обзор литературы). — СП-б., 1998. - С.47.

6.  Поворознкж В.В., Евтушенко О.А. Миокальцик в профилактике и лече­
нии метаболических заболеваний скелета / Проблемы остеологии. - 1999. - Т.2. -
№3.-С. 21-28.

7.  Aredia. Product monograph - Novartis Pharma AG,Basel. - 1999. - P 44.

8.  Blomqvist C. et al. Evaluation of salmon calcitonin treatment in Done rnetas-
tases from breast cancer. A controlled trial. - 1989. - V. 9. - P. 45-51.

9.  Body J.J. et al. Clinical research update: Zoledronate. Cancer. - 1997. - V.
80 (SupplS). - P. 1699-1701.



10.  Conte P.P. et al. Delay in progression of bone metastases in breast cancer
patients treated with intravenous pamidronate: results from a multinational random­
ized controlled trial / J. Clin.Jncol. - 1998. - V. 14. - P. 2552-2559.

11.       Diel I.J. et al. Continual oral versus intravenous interval therapy with
bisphosphonaates in patients with breast cancer and bone metastases.Pro»: / ASCO. -
1999. -V. 18. - P. 128a (abstr.488).

12.       Diel I.J. et al. Improvement of bone pain, quality of life and survival time
of breast cancer patients with metastatic bone disease treated with intravenous ihan-



dronate. / Eur. J.Cancer. - 1999. - V. 35 9 SuppI 4). - P. 83 (abstr.269).

13.      Escalante C.R., Bonin S.R. Oncologic emergencies. Inxancer Manage­
ments Multidisciplinary Approach / Ed By R. Pazdur, l.R.Coia, NY. - 1996/1997. -
P. 701-718.

14.      Fleisch H. Bisphsphonates: pharmacology and use in the treatment of tu­
mor-induced hypercalcaemic and metastatic bone disease / Drug. - 1991. —V. 42. - P.
919-944.

15.      German C/ et al. Salmon calcitonin treatment in born metastasis / Curr.Res.
- 1989.-V. 45.-P. 804-812.

16.      Kalston S.N. et al. Dose response study of ibandronate in treatment of can­
cer associated hypercalcemia / Breast Cancer. — 1997. — V. 75. — P. 296-300.

17.      Kanis J.A. et al. Clodronat decreases the freguency of skeletal metastases
in women with breast cancer / Bone. - 1996. - V. 19. - P. 663-667.

18.      Ljungball S. Use of clodronate and calcitonin in hipercalcemia due to ma­
lignancy / Rec.Results in Cancer Res. - 1999. - V. 116. - P. 40-45.

19.      Peterson A.H.G. et al. Double-blind, controlled trial of orale clodronate in
patients with bone metastases from breast cancer / J. Clin.Oncol. - 1997. — V. 11. - P.
59-65.

34



Научное издание

Терентюк Г.С., Черванёв В.А., Трояновская Л.П., Пальцев С.С.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

ПО ИММУНОФЕРМЕНТНОИ ДИАГНОСТИКЕ

ОНКОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ОРГАНОВ

РАЗМНОЖЕНИЯ ЖИВОТНЫХ

Издательство ВГАУ

JS4087, г. Воронеж, ул. Мичурина, 1

Телефон 53-57-97

Подписано в печать 03.06.2005 г. Формат 60x84

Гарнитура "Times New Roman". Печать офсетная.

Бумага офсетная № 1. Уч.-изд. л. 1,34. Усл. п. л. 2,04.

Тираж 1000 экз. Заказ № 875.

Отпечатано в полном соответствии с качеством предоставленного оригинала-макета в типографии "ИСТОКИ' 394087, г. Воронеж, ул. Мичурина, 1 Телефон 53-77-28

35
наверх
Гость
Незарегистрированный









Пост Отправлено: 28 мая 2007, 14:10 QUOTE

Хотелось бы знать Ваше мнение, если есть время прочитать.
Спасибо.
наверх
Сергей Нет на форуме
Doc
Персональный Аватар участника Ветеринары.ру
Мужик какой то


Группа:
Super Administrators
Сообщений: 28567
Дата регистрации:
января 2005

Москва, Сокольники.
Пост Отправлено: 28 мая 2007, 23:44 QUOTE

Пока нет, но и не онколог я ни разу. Спросите лучше у ДД.

--------------
Выезд на дом +7 (926) 180-3469  Цены: http://veterinars.ru/Page_Price.htm
Отзывы о работе: http://veterinars.ru/gb/
И я не консультирую в "Личные сообщения"! Личные сообщения для ЛИЧНЫХ сообщений!!!
наверх
Profile PM WEB ICQ 
2 ответов, начиная с 28 мая 2007, 14:07 < Предыдущая тема | Следующая тема >

[ Подписаться на эту тему :: Отправить тему по email :: Распечатать эту тему ]

 
Ответить в тему Новый вопрос ветеринару Новый опрос

Ответить: Практические рекомендации по иммуноферментной диаг
Кнопки iB кода
Вы отправляете как:
Guest
Добавить Вашу подпись для этого сообщения
Использовать смайлики в этом сообщении
Подписаться на эту тему
все смайлики
все iB коды
Русская клавиатура
Вставить фотку

  Ветеринарный FAQ  New FAQ - Типичные вопросы и частые ответы.          RULES: Правила Ветеринарного Форума.       Ветеринарная консультация - Как получить?   Как задать вопрос Ветеринару

Разработка, дизайн, хостинг и поддержка - Data-Stream            RSS - Лента новостей Ветеринары.ру  Ветеринары.ру на Рейтинг@Mail.ru